新任夜班保安发现，每天午夜，博物馆里的所有展品都会活过来追杀他。
失业的历史系研究生本杰明为了糊口，成为自然历史博物馆的夜班保安。第一晚，他就目睹了霸王龙骨架追着饮水机跑，复活节岛石像要吃他的巧克力棒。他得知博物馆曾受过一道古埃及咒语，每晚的“活人时间”只有六小时。为了活下去，本杰明必须与罗斯福蜡像、匈奴王和一只爱哭的渡渡鸟合作。他发现一位前保安想偷走咒语石版，把活人时间变成永久。在闭馆后的疯狂混战中，本杰明用他的历史知识反而“管理”起了这些历史人物。最终他不仅保护了博物馆，还意外发现自己是某个古老守夜人血脉的后代。
本片是《博物馆奇妙夜》的精神重启版，但笑料更密、特效更疯。恐龙骨架追车戏堪称年度名场面。本杰明从懦弱书生到“馆长”的成长线扎实动人，是一部聪明的合家欢爆米花电影。
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