布鲁克林水管工马力欧和路易吉被卷入神秘管道，掉进蘑菇王国，必须打败库巴才能回家。
马力欧和路易吉这对水管工兄弟在布鲁克林创业失败，却在维修一条诡异下水道时被吸入五彩管道，分别传送到了蘑菇王国和黑暗王国。马力欧遇到蘑菇王国公主桃花，得知库巴偷走了无敌星，要用它统治全宇宙。路易吉被抓走当人质，马力欧必须通过训练、搜集道具、联合大金刚一族来对抗库巴大军。最终决战中，马力欧吃下超级蘑菇变成“巨型马力欧”，与同样吃了道具的库巴在彩虹之路上展开肉搏。兄弟重逢后使出“双人旋转跳跃”绝技，将库巴踢入深渊。
完美还原游戏元素，彩蛋多到溢出。画面绚丽，节奏极快，是献给老玩家的一封情书，也是带孩子入门的完美选择。
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